細胞凍存程序降溫儀介紹與步驟！

    在細胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細胞保存這個實驗步驟，將暫時多出來的細胞冰凍保存，以zui大程度保存細胞活力。

一、細胞冷凍保存
1.  材料：
生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO (Sigma D-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene　5000-0020)、0.  4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、細胞凍存程序儀(也稱為程序降溫儀，品牌上海拓紛)
2.  冷凍保存方法：
(1)傳統(tǒng)方法: 冷存管置于4 ℃10分鐘--->-20 ℃30分鐘--->-80 ℃ 16～18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。
-20 ℃不可超過1小時，以防止胞內冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫：利用已設定程序的等速細胞凍存程序儀以-1～-3 ℃/分鐘之速度由室溫降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。
3.  步驟：
(1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0.  1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。
(4)取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示*之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。

    程序控制冷凍裝置俗稱：程序降溫儀，也稱為程序冷凍儀、胚胎冷凍儀、細胞冷凍儀、程控降溫儀；廣泛用于凍存細胞、胚胎等。采用微機控制技術，軟件，能較準確地控制液氮的施放量，從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡便、人機界面清楚。 

  我國臨床低溫醫(yī)學工作發(fā)展迅速，促進了移植醫(yī)學的發(fā)展，特別是在骨髓、造 血干細胞、皮膚、角膜、內分泌腺體、以及血管和瓣膜等的冷凍保存和移植應用取 得了顯著成績。成功的造血干細胞移植依賴于造血干細胞活力的保存。生物樣品在 降溫冷凍過程中，當由液態(tài)向固態(tài)變化的相變期內會釋放一定熱量，使其溫度回升， 不控制降溫速率的冷凍過程將會導致組織細胞死亡。準確地測定生物樣品的相變點， 用微機編制降溫程序，以便在樣品相變時加大液氮輸入量，克服相變樣品溫度的回 升，使細胞安全而迅速地度過相變期，這是提高被凍樣品成活率的關鍵環(huán)節(jié)。

 ☆主要技術指標☆
     溫度控制范圍:40℃~-180℃.
     溫度精度:    誤差<1℃
     降溫速度:    0.1℃/分~50℃/分范圍內可選
     升溫速度:    0.1℃/分~30℃/分范圍內可選

☆儀器結構☆:本儀器由以下四部分構成(標準配置):
溫控系統(tǒng)：在機箱上配置高精度智能溫控器，該溫控器通過RS485通訊協(xié)議和電腦連接；
電腦軟件：在電腦中運行上位機軟件，即可設定控溫程序，對箱體控溫；
冷凍箱:  內外全不銹剛結構.冷凍容機不小于200*200*200毫米.可同時容納冷凍管160個或血袋8個.
液氮罐及液氮加壓器: 液氮加壓器安裝在30立升的液氮罐上,使罐內自增壓,調節(jié)閥保持壓力穩(wěn)定.
☆軟件功能☆
1、顯示功能:
運行顯示如圖：.每步操作,每個功能都有屏幕顯示.實時顯示儀器工作狀態(tài)﹑溫度數(shù)據(jù)和曲線.

2、 編程功能:
可編制任意段數(shù)的用戶程序.計算機按照用戶程序控制冷凍過程.用戶程序可方便地編制﹑修改﹑存儲﹑調出.開機自動調出當前用戶程序.
3、運行控制功能:
隨機恒溫功能: 可隨時進入,隨時解除恒溫。
自動控制：設定程序后，可*自動運行。
手動控制: 程控時手控可參與控制.也可*手控。
4、數(shù)據(jù)處理功能
每次冷凍的全部數(shù)據(jù)和有關信息,都能自動形成一個數(shù)據(jù)文件存儲下來;
溫度數(shù)據(jù)和速度可按時間間隔列表或顯示溫度曲線.
可迅速方便地雙向檢索已存入的數(shù)據(jù)文件;
溫度曲線可局部放大,便于研究關鍵段的細微變化;
還有一些功能恕不一一列出,這些功能如能配合使用,將為您的冷凍帶來極大的方便.
5、軟件升級
  隨著公司軟件不斷的更新,用戶可享受免費升級服務.
 
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